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506.#.#.a: Público

650.#.4.x: Biología y Química

336.#.#.b: other

336.#.#.3: Registro de colección de proyectos

336.#.#.a: Registro de colección universitaria

351.#.#.b: Proyectos Universitarios PAPIIT (PAPIIT)

351.#.#.a: Colecciones Universitarias Digitales

harvesting_group: ColeccionesUniversitarias

270.1.#.p: Dirección General de Repositorios Universitarios. contacto@dgru.unam.mx

590.#.#.c: Otro

270.#.#.d: MX

270.1.#.d: México

590.#.#.b: Concentrador

883.#.#.u: https://datosabiertos.unam.mx/

883.#.#.a: Portal de Datos Abiertos UNAM, Colecciones Universitarias

590.#.#.a: Administración central

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883.#.#.q: Dirección General de Repositorios Universitarios

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100.1.#.a: Juan Manuel Arias Montaño

524.#.#.a: Dirección de Desarrollo Académico, Dirección General de Asuntos del Personal Académico (DGAPA). "Determinantes moleculares de las propiedades biofísicas de los canales de calcio dependientes del voltaje de bajo umbral tipo T", Proyectos Universitarios PAPIIT (PAPIIT). En "Portal de datos abiertos UNAM" (en línea), México, Universidad Nacional Autónoma de México.

720.#.#.a: Juan Manuel Arias Montaño

245.1.0.a: Determinantes moleculares de las propiedades biofísicas de los canales de calcio dependientes del voltaje de bajo umbral tipo T

502.#.#.c: Universidad Nacional Autónoma de México

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264.#.1.c: 2009

307.#.#.a: 2019-05-23 18:40:21.491

653.#.#.a: Biofísica; Fisiología

506.1.#.a: La titularidad de los derechos patrimoniales de este recurso digital pertenece a la Universidad Nacional Autónoma de México. Su uso se rige por una licencia Creative Commons BY 4.0 Internacional, https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/legalcode.es, fecha de asignación de la licencia 2009, para un uso diferente consultar al responsable jurídico del repositorio por medio de contacto@dgru.unam.mx

041.#.7.h: spa

500.#.#.a: Los canales de calcio dependientes del voltaje tienen un papel importante en la fisiología de las células excitables al ser la fuente del calcio para la generación de la señal que desencadena las respuestas celulares, tales como la contracción muscular, la liberación de neurotransmisores y los potenciales de acción. Este último fenómeno puede ser el resultado directo de la entrada del calcio a través de esos canales o por la despolarización de la membrana plasmática hasta alcanzar el umbral de los canales de sodio dependientes del voltaje. Recientemente se ha descrito la participación de los canales de calcio dependientes del voltaje de bajo umbral tipo T en la fisiopatología de algunas enfermedades como la epilepsia de ausencia, la enfermedad de Parkinson, el tinitus, los desordenes neurosiquiatricos y el dolor neurogénico. La secuenciación de los genes que codifican para los canales de cacio tipo T en pacientes que mostraron episodios de epilepsia de ausencia infantil mostró que presentaban mutaciones puntuales en la isoforma Cav3.2 de este tipo de canales. Estas mutaciones se concentran en el asa que conecta los dominios I y II de ese canal. Las mutaciones introducidas en canales recombinantes mostraron que estas generan canales con propiedades biofísicas diferentes, algunas de las cuales predicen un aumento de la excitabilidad de la membrana plasmática en modelos por computadora, lo cual puede conducir a la generación de patrones de disparo de las neuronas que tienen la misma frecuencia observada en los electroencefalogramas de los pacientes durante los periodos de epilepsia. Adicionalmente, estudios de la expresión de los canales recombinantes mutantes indicaron que la proporción de los canales expresados a nivel de la membrana plasmática aumenta, lo cual también puede ayudar a explicar la hiperexcitabilidad de las neuronas que expresan estos canales. De forma similar a lo que ocurre en los canales de calcio de alto umbral, el asa I-II es una región importante para la función y expresión de los canales de calcio de bajo umbral tipo T. Se reconoce en la región proximal del asa, ~ 60 aminoácidos, la presencia de un dominio denominado freno de la compuerta (“gating brake”), el cual presenta una estructura de dos hélices orientadas de forma antiparalela y con posibles interacciones electrostáticas entre residuos con cargas opuestas (Glu, Arg, Lys). La región distal del asa I-II tiene como papel el regular la proporción de canales que se localizan en la membrana plasmática. Por el momento se desconoce la forma como ambas regiones del asa I-II llevan a cabo sus funciones, por lo cual en este proyecto se propone la creación de quimeras entre los canales de calcio tipo con cinéticas rápidas, Cav3.1 y Cav3.2, con aquellos de cinéticas lentas, Cav3.3. La hipótesis del proyecto es que la estructura del freno de la compuerta es la misma en los tres miembros de la familia, y que sólo la interacción específica con otras regiones del canal promueve la regulación de la apertura/cierre del canal a través de ese dominio y que da por resultado ya sea canales con cinéticas lentas o con cinéticas rápidas. Por tanto se crearán inicialmente quimeras en las que las asas I-II de los canales de cinética rápida se intercambien con los de cinéticas lentas, esperándose que no ocurran cambios en las propiedades biofísicas de estos canales debido a que existen en el canal aceptor del asa sitios que interaccionan con el freno de la compuerta y que es la combinación de estas regiones lo que da por resultado el fenotipo del canal aceptor y no que el asa I-II determine el fenotipo. A continuación se añadirán en estas quimeras otras regiones, inicialmente el extremo carboxilo terminal y el asa III-IV, con el fin de promover en ellas las interacciones con el freno de la compuerta en el asa I-II y de esta forma transformar el fenotipo de un canal de activación rápida al de uno de activación lenta y viceversa. Las quimeras de los canales de calcio tipo T se obtendrán mediante la técnica de la extensión del empalme por la PCR ("overlapping extensión PCR"). La expresión de los canales quiméricos se realizará en ovocitos del Xenopus laevis, el cual es sistema de expresión robusto y ampliamente usado para este tipo de estudios. Las corrientes generadas por los cambios de voltaje aplicados se registrarán mediante la técnica de fijación del voltaje de dos electrodos. A partir del análisis de estos registros se determinarán las propiedades biofísicas de los diferentes canales quiméricos y se les comparará con las de los tipo nativo.

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No entro en nada

No entro en nada 2

Registro de colección universitaria

Determinantes moleculares de las propiedades biofísicas de los canales de calcio dependientes del voltaje de bajo umbral tipo T

Facultad de Estudios Superiores Iztacala, UNAM, Portal de Datos Abiertos UNAM, Colecciones Universitarias

Licencia de uso

Procedencia del contenido

Entidad o dependencia
Facultad de Estudios Superiores Iztacala, UNAM
Entidad o dependencia
Dirección General de Asuntos del Personal Académico
Acervo
Colecciones Universitarias Digitales
Repositorio
Portal de Datos Abiertos UNAM, Colecciones Universitarias
Contacto
Dirección General de Repositorios Universitarios. contacto@dgru.unam.mx

Cita

Dirección de Desarrollo Académico, Dirección General de Asuntos del Personal Académico (DGAPA). "Determinantes moleculares de las propiedades biofísicas de los canales de calcio dependientes del voltaje de bajo umbral tipo T", Proyectos Universitarios PAPIIT (PAPIIT). En "Portal de datos abiertos UNAM" (en línea), México, Universidad Nacional Autónoma de México.

Descripción del recurso

Título
Determinantes moleculares de las propiedades biofísicas de los canales de calcio dependientes del voltaje de bajo umbral tipo T
Colección
Proyectos Universitarios PAPIIT (PAPIIT)
Responsable
Juan Manuel Arias Montaño
Fecha
2009
Descripción
Los canales de calcio dependientes del voltaje tienen un papel importante en la fisiología de las células excitables al ser la fuente del calcio para la generación de la señal que desencadena las respuestas celulares, tales como la contracción muscular, la liberación de neurotransmisores y los potenciales de acción. Este último fenómeno puede ser el resultado directo de la entrada del calcio a través de esos canales o por la despolarización de la membrana plasmática hasta alcanzar el umbral de los canales de sodio dependientes del voltaje. Recientemente se ha descrito la participación de los canales de calcio dependientes del voltaje de bajo umbral tipo T en la fisiopatología de algunas enfermedades como la epilepsia de ausencia, la enfermedad de Parkinson, el tinitus, los desordenes neurosiquiatricos y el dolor neurogénico. La secuenciación de los genes que codifican para los canales de cacio tipo T en pacientes que mostraron episodios de epilepsia de ausencia infantil mostró que presentaban mutaciones puntuales en la isoforma Cav3.2 de este tipo de canales. Estas mutaciones se concentran en el asa que conecta los dominios I y II de ese canal. Las mutaciones introducidas en canales recombinantes mostraron que estas generan canales con propiedades biofísicas diferentes, algunas de las cuales predicen un aumento de la excitabilidad de la membrana plasmática en modelos por computadora, lo cual puede conducir a la generación de patrones de disparo de las neuronas que tienen la misma frecuencia observada en los electroencefalogramas de los pacientes durante los periodos de epilepsia. Adicionalmente, estudios de la expresión de los canales recombinantes mutantes indicaron que la proporción de los canales expresados a nivel de la membrana plasmática aumenta, lo cual también puede ayudar a explicar la hiperexcitabilidad de las neuronas que expresan estos canales. De forma similar a lo que ocurre en los canales de calcio de alto umbral, el asa I-II es una región importante para la función y expresión de los canales de calcio de bajo umbral tipo T. Se reconoce en la región proximal del asa, ~ 60 aminoácidos, la presencia de un dominio denominado freno de la compuerta (“gating brake”), el cual presenta una estructura de dos hélices orientadas de forma antiparalela y con posibles interacciones electrostáticas entre residuos con cargas opuestas (Glu, Arg, Lys). La región distal del asa I-II tiene como papel el regular la proporción de canales que se localizan en la membrana plasmática. Por el momento se desconoce la forma como ambas regiones del asa I-II llevan a cabo sus funciones, por lo cual en este proyecto se propone la creación de quimeras entre los canales de calcio tipo con cinéticas rápidas, Cav3.1 y Cav3.2, con aquellos de cinéticas lentas, Cav3.3. La hipótesis del proyecto es que la estructura del freno de la compuerta es la misma en los tres miembros de la familia, y que sólo la interacción específica con otras regiones del canal promueve la regulación de la apertura/cierre del canal a través de ese dominio y que da por resultado ya sea canales con cinéticas lentas o con cinéticas rápidas. Por tanto se crearán inicialmente quimeras en las que las asas I-II de los canales de cinética rápida se intercambien con los de cinéticas lentas, esperándose que no ocurran cambios en las propiedades biofísicas de estos canales debido a que existen en el canal aceptor del asa sitios que interaccionan con el freno de la compuerta y que es la combinación de estas regiones lo que da por resultado el fenotipo del canal aceptor y no que el asa I-II determine el fenotipo. A continuación se añadirán en estas quimeras otras regiones, inicialmente el extremo carboxilo terminal y el asa III-IV, con el fin de promover en ellas las interacciones con el freno de la compuerta en el asa I-II y de esta forma transformar el fenotipo de un canal de activación rápida al de uno de activación lenta y viceversa. Las quimeras de los canales de calcio tipo T se obtendrán mediante la técnica de la extensión del empalme por la PCR ("overlapping extensión PCR"). La expresión de los canales quiméricos se realizará en ovocitos del Xenopus laevis, el cual es sistema de expresión robusto y ampliamente usado para este tipo de estudios. Las corrientes generadas por los cambios de voltaje aplicados se registrarán mediante la técnica de fijación del voltaje de dos electrodos. A partir del análisis de estos registros se determinarán las propiedades biofísicas de los diferentes canales quiméricos y se les comparará con las de los tipo nativo.
Tema
Biofísica; Fisiología
Identificador global
http://datosabiertos.unam.mx/DGAPA:PAPIIT:IN214509

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