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506.#.#.a: Público

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720.#.#.a: Santiago Martínez Calvillo

245.1.0.a: RNA polimerasa III en parásitos tripanosomátidos: análisis funcional de regiones promotoras y factores de transcripción

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653.#.#.a: Transcripción; Bioquímica, biología molecular, genética y genómica

506.1.#.a: La titularidad de los derechos patrimoniales de este recurso digital pertenece a la Universidad Nacional Autónoma de México. Su uso se rige por una licencia Creative Commons BY 4.0 Internacional, https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/legalcode.es, fecha de asignación de la licencia 2012, para un uso diferente consultar al responsable jurídico del repositorio por medio de contacto@dgru.unam.mx

041.#.7.h: spa

500.#.#.a: Los tripanosomátidos son un grupo de protozoarios que producen enfermedades graves en regiones tropicales de casi todo el mundo. En el grupo se incluye a Leishmania spp., agente causal de la leishmaniasis y a Trypanosoma brucei, causante de la enfermedad del sueño. Además de su relevancia médica, estos parásitos son importantes por presentar mecanismos de expresión genética atípicos. Poco se sabe en tripanosomátidos sobre la transcripción de la RNA Polimerasa III (Pol III), la cual sintetiza varios tipos de moléculas de RNA pequeñas que juegan papeles críticos en el metabolismo celular, como RNAs de transferencia (RNAt) y el RNA ribosomal (rRNA) 5S. El tRNA-Sec se encarga de incorporar selenocisteína (el aminoácido 21) a un grupo de proteínas esenciales llamadas selenoproteínas, mientras que el rRNA 5S es un constituyente estructural del ribosoma, por lo que también lleva a cabo un papel esencial en la síntesis de proteínas. Debido a la importancia que tiene estas moléculas de RNA, estamos interesados en estudiarlas en los tripanosomátidos. En vertebrados se requiere principalmente de tres factores de transcripción para que Pol III inicie la transcripción: TFIIIA, TFIIIB y TFIIIC. Recientemente se identificó a la proteína Maf1, la cual funciona como regulador negativo de la actividad de Pol III. De estas proteínas, sólo TFIIIB (formado por las subunidades BRF1, Bdp1 y TBP) y Maf1 han sido identificados en tripanosomátidos. Así, el objetivo principal de este proyecto es el de estudiar diversos aspectos de la transcripción de Pol III en L. major y T. brucei. Los objetivos específicos son: [1] Caracterizar molecularmente el rRNA 5S. Se localizarán los sitios de inicio y término de la transcripción de los genes del RNAr 5S en L. major mediante ensayos 5’ y 3’-RACE. La unión específica de proteínas nucleares al gen se analizará mediante geles de retardo. La purificación e identificación de dichas proteínas se llevará a cabo mediante ensayos de DNA pull-down. [2] Estudiar la transcripción del tRNA-Sec. Por medio de experimentos de run-on nuclear llevados a cabo con células irradiadas con luz UV se determinará si el gen de tRNA-Sec de L. major contiene su propia región promotora o si es transcrito como parte de un policistrón. Ensayos en presencia de inhibidores específicos revelarán la identidad de la RNA polimerasa que transcribe el gen. Asimismo, se determinará la estructura nucleosomal del gen de tRNA-Sec y se comparará con la de genes sintetizados por Pol II y por Pol III. Mediante ensayos ChIP de determinará si Pol III se une al gen del tRNA-Sec de L. major. [3] Caracterizar funcionalmente factores de transcripción de Pol III. Se estudiarán BRF1 (subunidad de TFIIIB) y Maf1, represor de la transcripción de Pol III. Para ello, se generarán líneas celulares en las que se induzca el knock-down de BRF1 y Maf1 mediante RNA de interferencia. Se analizarán los efectos de los knock-downs de las 2 proteínas en el crecimiento celular, por medio de curvas de crecimiento. Posteriormente, se determinarán los efectos de los knock-downs en la abundancia de moléculas de RNA sintetizadas por las tres RNA polimerasas, mediante ensayos de run-on nuclear. Estos experimentos se llevarán a cabo únicamente en T. brucei, debido a que en L. major no funcionan los knock-downs por RNAi. De forma paralela se estudiarán dos proteínas que contienen dedos de zinc, TbZ5 y TbZ4, y que son los probables ortólogos de TFIIIA. _x000D_ _x000D_

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No entro en nada

No entro en nada 2

Registro de colección universitaria

RNA polimerasa III en parásitos tripanosomátidos: análisis funcional de regiones promotoras y factores de transcripción

Facultad de Estudios Superiores Iztacala, UNAM, Portal de Datos Abiertos UNAM, Colecciones Universitarias

Licencia de uso

Procedencia del contenido

Entidad o dependencia
Facultad de Estudios Superiores Iztacala, UNAM
Entidad o dependencia
Dirección General de Asuntos del Personal Académico
Acervo
Colecciones Universitarias Digitales
Repositorio
Contacto
Dirección General de Repositorios Universitarios. contacto@dgru.unam.mx

Cita

Dirección de Desarrollo Académico, Dirección General de Asuntos del Personal Académico (DGAPA). "RNA polimerasa III en parásitos tripanosomátidos: análisis funcional de regiones promotoras y factores de transcripción", Proyectos Universitarios PAPIIT (PAPIIT). En "Portal de datos abiertos UNAM" (en línea), México, Universidad Nacional Autónoma de México.

Descripción del recurso

Título
RNA polimerasa III en parásitos tripanosomátidos: análisis funcional de regiones promotoras y factores de transcripción
Colección
Proyectos Universitarios PAPIIT (PAPIIT)
Responsable
Santiago Martínez Calvillo
Fecha
2012
Descripción
Los tripanosomátidos son un grupo de protozoarios que producen enfermedades graves en regiones tropicales de casi todo el mundo. En el grupo se incluye a Leishmania spp., agente causal de la leishmaniasis y a Trypanosoma brucei, causante de la enfermedad del sueño. Además de su relevancia médica, estos parásitos son importantes por presentar mecanismos de expresión genética atípicos. Poco se sabe en tripanosomátidos sobre la transcripción de la RNA Polimerasa III (Pol III), la cual sintetiza varios tipos de moléculas de RNA pequeñas que juegan papeles críticos en el metabolismo celular, como RNAs de transferencia (RNAt) y el RNA ribosomal (rRNA) 5S. El tRNA-Sec se encarga de incorporar selenocisteína (el aminoácido 21) a un grupo de proteínas esenciales llamadas selenoproteínas, mientras que el rRNA 5S es un constituyente estructural del ribosoma, por lo que también lleva a cabo un papel esencial en la síntesis de proteínas. Debido a la importancia que tiene estas moléculas de RNA, estamos interesados en estudiarlas en los tripanosomátidos. En vertebrados se requiere principalmente de tres factores de transcripción para que Pol III inicie la transcripción: TFIIIA, TFIIIB y TFIIIC. Recientemente se identificó a la proteína Maf1, la cual funciona como regulador negativo de la actividad de Pol III. De estas proteínas, sólo TFIIIB (formado por las subunidades BRF1, Bdp1 y TBP) y Maf1 han sido identificados en tripanosomátidos. Así, el objetivo principal de este proyecto es el de estudiar diversos aspectos de la transcripción de Pol III en L. major y T. brucei. Los objetivos específicos son: [1] Caracterizar molecularmente el rRNA 5S. Se localizarán los sitios de inicio y término de la transcripción de los genes del RNAr 5S en L. major mediante ensayos 5’ y 3’-RACE. La unión específica de proteínas nucleares al gen se analizará mediante geles de retardo. La purificación e identificación de dichas proteínas se llevará a cabo mediante ensayos de DNA pull-down. [2] Estudiar la transcripción del tRNA-Sec. Por medio de experimentos de run-on nuclear llevados a cabo con células irradiadas con luz UV se determinará si el gen de tRNA-Sec de L. major contiene su propia región promotora o si es transcrito como parte de un policistrón. Ensayos en presencia de inhibidores específicos revelarán la identidad de la RNA polimerasa que transcribe el gen. Asimismo, se determinará la estructura nucleosomal del gen de tRNA-Sec y se comparará con la de genes sintetizados por Pol II y por Pol III. Mediante ensayos ChIP de determinará si Pol III se une al gen del tRNA-Sec de L. major. [3] Caracterizar funcionalmente factores de transcripción de Pol III. Se estudiarán BRF1 (subunidad de TFIIIB) y Maf1, represor de la transcripción de Pol III. Para ello, se generarán líneas celulares en las que se induzca el knock-down de BRF1 y Maf1 mediante RNA de interferencia. Se analizarán los efectos de los knock-downs de las 2 proteínas en el crecimiento celular, por medio de curvas de crecimiento. Posteriormente, se determinarán los efectos de los knock-downs en la abundancia de moléculas de RNA sintetizadas por las tres RNA polimerasas, mediante ensayos de run-on nuclear. Estos experimentos se llevarán a cabo únicamente en T. brucei, debido a que en L. major no funcionan los knock-downs por RNAi. De forma paralela se estudiarán dos proteínas que contienen dedos de zinc, TbZ5 y TbZ4, y que son los probables ortólogos de TFIIIA. _x000D_ _x000D_
Tema
Transcripción; Bioquímica, biología molecular, genética y genómica
Identificador global
http://datosabiertos.unam.mx/DGAPA:PAPIIT:IN210712

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